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細胞增殖與細胞生長曲線實驗(CCK 8/MTT/WST)

更新:2015-10-5 22:35:19      點擊:
介紹

細胞增殖與細胞生長曲線實驗

細胞增殖及細胞毒性相關檢測服務
細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物以細胞分裂的方式產生新的個體。多細胞生物以細胞分裂的方式產生新的細胞,用來補充體內衰老死亡的細胞;同時,多細胞生物可以由一個受精卵,經過細胞的分裂和分化,最終發育成一個新的多細胞個體。通過細胞分裂,可以將復制的遺傳物質,平均地分配到兩個子細胞中去。

細胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8,MTT等方法。其中測定細胞生長曲線是檢測細胞絕對生長數的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之后,經過短暫的懸浮然后貼壁,隨后經過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數生長期。在細胞達到飽和密度后,停止生長,進入平頂期,然后退化衰亡。為了準確描述整個 過程中細胞數目的動態變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數生長期,呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。以存活細胞數(萬/mL)對培養時間(h或d)作圖,即得生長曲線。生博公司目前主要使用MTT、CCK8和Am-blue三種試劑測定細胞生長曲線。

細胞增殖及細胞生長曲線實驗

MTT檢測
MTT檢測以活細胞代謝物還原劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT噻唑藍為基礎。MTT是一種黃顏色的染料,活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比,從而可以對細胞的活力、增殖與凋亡情況進行檢測。

CCK8檢測
CCK-8的原理跟MTT是相同的,不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟,因此可以減少一定的誤差,其重復性優于MTT;且對細胞毒性小。

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